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关于Tris-HCl的问题
2010-08-23 17:27:13 来源:不详 浏览:18994

要开始做自己的学生课题了,第一次接触Tris-HCl,只知道它是缓冲液,不知道它是什么东东,如何配置。还请大家赐教!谢!

wzuny (2004-11-15 20:50:00)

Tris-HCl是生化常用试剂,做合成的很少用。。。。

看下面的东东对你有没有用?

实验室常用溶液的配制一.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。

1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。

100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套)

5mol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。

10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10%SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。

2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。

100%三氯乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制)

2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。

100×Denhardt试剂(Denhardt's regent)

成分及终浓度

配制100ml溶液各成分的用量

2%聚蔗糖(Ficoll,400型)2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)2%BSA(组分V)水

2g2g2g加水至总体积为100ml

依照上表称取各组分,溶于水中定容。过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮存。

10×标准DNA连接酶缓冲液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端连接)

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分的用量

0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L 盐酸亚精胺(可选)0.5mg/ml BSA(组分V)(可选)水

5ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液0.5ml 10 mg/mL 贮液2.25ml

将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃ 。

100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions)可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80℃可贮存至少6个月。

10mmol/L dNTP混合液

成分及终浓度

配制20ul溶液各成分的用量

10mmol/L dATP10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水

2ul 100 mmol/L dATP 贮液2ul 100 mmol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul

20%PEG 8000/2.5M NaCl

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分的用量

质量浓度为20%聚乙二醇2.5mol/L 氯化钠水

20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠补足100ml

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×SSC

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

300mmol/L 柠檬酸三钠(二水)3mol/L 氯化钠水

88.2g175.3g补足1L

溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。

DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水加100ul DEPC 于 100ml 水中,使DEPC的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h,然后在15 psi 条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺(deionized formamide)直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。

磷酸缓冲液(phosphate buffer)按照下表所给定的体积,混合1 mol/L 的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L 磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)贮液:溶解138g于足量水中,使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1mol/L 磷酸二氢钠(ml)

1mol/L 磷酸氢二钠(ml)

最终pH值

877850815775735685625565510450390330280

123150185225265315375435490550610670720

6.06.16.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2

TE(用于悬浮和贮存DNA)

成分及终浓度

配制100ml溶液各成分的用量

10mmol/L Tris-HCl1mmol/L EDTA水

1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0,25℃)200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)98.8ml

Tris缓冲液(Tris-HCl buffer)将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6N),用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积(ml)

pH

8.6142128.53846566671.376

9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2

二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

电泳缓冲液

50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水

242g57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L)200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)补足1L

5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水

54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)补足1L

染料

1%溴酚蓝(bromophenol blue)加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF)溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide)小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。

凝胶上样液(gel loading solutions)6×碱性凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18%聚蔗糖(400型)0.15%溴甲酚绿0.25%二甲苯青FF水

300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)1.8g15mg25mg补足到10ml

6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15%聚蔗糖(400型)水

1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)1.5g补足到10ml

6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.25%溴酚蓝0.25%二甲苯青FF15%聚蔗糖(400型)水

2.5ml 1%溴酚蓝2.5ml 1%二甲苯青FF1.5g 补足到10ml

6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50%甘油水

1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)3ml 3.9ml

6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40%聚蔗糖水

1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)4g 补足到10ml

10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.2%溴酚蓝0.2%二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1%SDS50%甘油 水

20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10% SDS5ml补足到10ml

三.常用培养基

LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:

蛋白胨

10g

酵母提取物

5g

氯化钠

10g

如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:

蛋白胨

20g

酵母提取物

5g

氯化钠

0.5g

1 mol/L 氯化钾

2.5ml

用水补足体积到1L。分成100ml的小份,高压灭菌。培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外,再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌)。

TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:

蛋白胨

12g

酵母提取物

24g

甘油

4ml

各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃,再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。

2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中:

蛋白胨

16g

酵母提取物

10g

氯化钠

4ml

如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中:

蛋白胨

20g

酵母提取物

10g

葡萄糖

20g

用水补足体积为1L后,高压灭菌。建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸,因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板,需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四.常用抗生素

氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml)溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

链霉素(streptomycin)(50mg/ml)溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml)溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

四环素(tetracyyline)(10mg/ml)溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

wzuny (2004-11-15 20:53:00)

溶液的配制:

Tris-HCl缓冲液:pH=8.20,c=150mmol/L,V=100mL;

50 mL150 mmol/L Tris碱溶液与22.9 mL150 mmol/LHCl溶液混合后加入去离子水定容至100mL。

看看下面这个链接,各种不同PH值的都有,更详细些: http://www.cclis.com/lab.asp?Id=950

zhuzhonghua (2004-11-16 10:06:00)
要买TRIS(三羟甲基氨基甲烷)吗?我这里有。
hjspeeder (2004-11-20 11:29:00)
用过一次,是用来提取RNA的,具体的不是太清楚!
fengzi913 (2007-7-26 13:22:00)

按摩尔数配好tris碱后滴加盐酸,用PH计控制你需要的PH值

缓冲溶液,一般它的PH都调到8左右

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