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Hla分型技术
2010-08-20 12:57:43 来源:不详 浏览:5226

主要组织相容性复合物(mhc)是脊椎动物体内最复杂且具有高度多态性的基因群。1984年george snell 首次发现小鼠mhc即h-2,1958年dausset 发现了人的mhc即hla基因。mhc的表达产物称为主要组织相容性抗原,mhc抗原是有核细胞表面膜蛋白分子,对抗原递呈和免疫信号传递起关键作用。

hla基因,位于6号染色体上短臂上,长约4000kb。hla是目前所知人体最复杂的遗传多态性系统,有几十个基因座位,每个基因座位又有几十个等位基因,且呈共显性表达。由于mhc基因位于同一条染色体上,其多基因座位上的基因型组合相对稳定,很少发生同源染色体间交换,这就构成了以单元型(haplotype,即在同一条染色体上紧密连锁的一系列等位基因的特殊组合)为特征的遗传。按中国人常见的a座位基因有13个,b座位基因有30个计算,可组成的单元型约有13×30=390种之多。理论上估计,父母各给一串单元型给子女,便会形成4.3万种hla-ab血型。事实上,hla 各基因并非完全随机地槌傻ピ停浅氏殖隽黄胶猓╨inkage disequilibrium,ld)的特点。理论推测的hla 分型数量巨大,但对一个具体的民族来说并非如此。世界上各个民族人群的hla多态性和单元型都有各自的特点。总体来讲,中国北方汉族、北美白人和北美黑人人群的多态性较中国南方汉族和日本人群丰富。即使在中国,地区间也存在差异。在中国汉族群体中抗原a1、a3、b13、b44和b51频率呈北高南低分布,而抗原a24、b46、b60呈北低南高分布。在中国汉族群体中常见的a30-b13-drb1*07,a1-b37-drb1*10单体型频率呈北高南低分布,在江浙沪汉族人群中频率较北方汉族人群下降,而a2-b46-drb1*09,a33-b58-drb1*17,a33-b58-drb1*13单体型频率呈北低南高分布。hla多态性程度可见一斑。

hla研究涉及免疫学、生物学、遗传学、分子生物学、医学等多个学科,并已发展成为一个独立的学科分支。迄今hla研究已达到相当深入的水平,并在诸多方面取得显著进展,包括hla复合体结构;hla分子结构及其表达的调控;hla分子功能,尤其是在抗原处理、呈递及t细胞识别中的作用;hla的dna分型及多态性研究;hla与疾病的关系;hla与移植的关系等。hla研究不仅使器官移植成为一种极有价值的治疗手段,并给基础与临床免疫带来了突破性进展。已经证实,hla复合体中存在控制免疫应答的基因以及hla参与约束免疫细胞间相互作用,这表示hla涉及生命活动的各个水平与多个方面。可以预期,对hla的研究将继续成为免疫遗传学最活跃的部分;对hla的应用将扩展到基础、临床、预防医学的各个领域。

纵观hla系统的研究过程,其发展无不与技术的手段的突破与运用有密切关系。70年代到80年代末期主要是血清学研究;90年代以来,hla进入了分子水平研究阶段,进展尤为显著。hla分型技术同样走过了这一历程。建立于60年代并不断完善的血清学及细胞学分型技术主要侧重于分析hla产物特异性。

血清学分型借助的是微量淋巴细胞毒试验(microlymphocytotoxicitytest)或称补体依赖的细胞毒试验(complement dependent cytotoxicity test,cdc)。取已知hla抗血清加入待测外周血淋巴细胞,作用后加入兔补体,充分作用后加入染料,,着染的细胞为死亡细胞,依据特异性抗体介导的补体系统对靶细胞溶解的原理,待检淋巴细胞表面具有已知抗血清所针对的抗原。血清学分型存在诸多缺点:①标准分型抗体亲和力较弱、效价较低、易产生交叉反应,②缺少某些单价抗血清;③某些病理过程可能导致外周血淋巴细胞表面抗原性质发生改变.干扰抗原—抗体反应;④国内供hla—i类抗原分型的血清板来源困难、质量欠佳。上述因素均严重影响了hla分型结果的可靠性及该技术的推广应用。

细胞学分型技术指的是通过纯合分型细胞(homozygote typing cell,htc)及预致敏淋巴细胞试验

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